Афлатоксины в пищевых продуктах

Что представляют собой афлатоксины

В недоброкачественной пище образуются плесневые грибки – Аспергиллы. Афлатоксины – это продукт жизнедеятельности таких микроорганизмов. Во влажных условиях происходит заплесневение пищи с выделением ядов. Афлатоксины относятся к большой группе веществ, которые называются микотоксинами Это яды, которые вырабатывают грибковые микроорганизмы.

Выделяют 4 вида афлатоксинов – это В1, В2, G1 и G2. Кроме этого, в продуктах могут содержаться их метаболиты – М1, М2, G2а и другие. Эти яды очень устойчивы и сохраняются даже при отваривании или обжаривании пищи.

Плесневой грибок не всегда можно обнаружить по внешнему виду продукта. Пища может не менять ни вкуса, ни запаха. Однако если на продуктах имеются явные признаки заплесневения, то их необходимо немедленно выбрасывать. Такая еда может нанести серьезный вред здоровью. Особенна опасна плесень желтого цвета, это явный признак заражения пищи аспергиллами.

Нередко хозяйки отрезают заплесневевший край хлеба или картофелины и употребляют продукт в пищу. Делать этого ни в коем случае нельзя, такую еду необходимо выбрасывать. Если на пище уже образовалась плесень, то грибок невозможно удалить. Микроорганизм распространяет свои нити глубоко в структуру продукта.

В каких продуктах содержатся

Среда распространения – все зерновые продукты, концентрированные соки, сухофрукты, хлебобулочные изделия, яйца, молоко, специи, напитки ежедневного приема (чай, кофе) и ряд других продуктов. Опасность представляют продукты, у которых в составе присутствуют красители и усилители вкуса (ароматизаторы).

  • Некроз печени;
  • Ослабление иммунитета;
  • Нарушение биологического обмена веществ;
  • Снижение образования желчных солей;
  • Нарушение обмена минеральных веществ;
  • Ухудшение всасывания жиров;

Афлатоксины в пищевых продуктах

В какой пище содержатся такие опасные вещества? Афлатоксины могут находиться в любой еде, зараженной плесневым грибком. Чаще всего этот яд обнаруживается в следующих продуктах:

  • орехах;
  • чае;
  • специях;
  • сухофруктах;
  • зерновых культурах;
  • хлебе;
  • кофе;
  • рисе;
  • кукурузе;
  • молоке;
  • мясе;
  • яйцах.

Афлатоксин М1 в молоке, яйцах и мясе обнаруживается в тех случаях, если продукты были получены от животных, употреблявших зараженные зерновые корма. В кофе, чае и орехах образуется другой тип яда – В1. Он обладает не только гепатотоксическим, но и канцерогенным действием. Люди часто ошибочно полагают, что чай и кофе можно хранить очень длительное время.

Афлатоксин в арахисе обнаруживается гораздо чаще, чем в других продуктах. Даже жареные зерна могут быть заражены, ведь тепловая обработка не уничтожает этот яд.

Действие микотоксинов на организм

При поступлении в организм афлатоксины атакуют печень. Эти яды вызывают жировое перерождение гепатоцитов, что в дальнейшем может привести к циррозу.

Микотоксины подавляют синтез белка в организме. Это вызывает поражение сердечной мышцы и почек, а также отрицательно сказывается на иммунитете. Особенно опасно употребление зараженных продуктов для беременных женщин. Яды грибковой плесени могут вызывать аномалии развития у плода. Также эти токсины могут проникать в материнское молоко и стать причиной отравления младенца.

Смертельная доза афлатоксина составляет 75 мг на 1 кг веса человека. При таком тяжелом отравлении летальный исход наступает в течение двух суток вследствие печеночной недостаточности.

Токсичная доза афлатоксина составляет 1,7 мг на 1 кг массы тела. Даже в таких небольших количествах это вещество ядовито. Если в организм человека систематически поступают малые дозы микотоксинов, то развивается хроническое отравление. Это состояние характеризуется следующими проявлениями:

  • ухудшением всасывания жиров и пигментов;
  • нарушением метаболизма витаминов и минеральных веществ;
  • нарушением продукции желчных солей;
  • повышением хрупкости костей;
  • снижением защитных сил организма;
  • задержкой физического и психического развития у детей.

Такие нарушения возникают, если человек на протяжении длительного времени употребляет продукты с афлатоксинами. В этом случае проблемы со здоровьем развиваются постепенно. Если же в организм попадает большое количество яда, то развивается симптоматика острого отравления.

Для человека весом около 65 кг безопасной считается дневная доза афлатоксинов от 0,4 до 0,7 мкг. Такое малое количество этих веществ не приводит к отклонениям в самочувствии.

Симптомы отравления

При данном виде отравления, симптомы проявляются очень быстро. Буквально через полчаса.

  • Резкое снижение аппетита;
  • Ощущение усталости;
  • Появление отечности;
  • Признаки тошноты или постоянная рвота;
  • Острая боль в голове;
  • Признаки,напоминающие желтуху;
  • Появление красных пятен на коже;
  • Нарушение координации;
  • Судорога;
  • Паралич;
  • Резкая боль в районе печени;
  • Нарушение работы кишечника;
  • Равнодушие и слабость.

В случае если в организм попадет большое количество афлатоксина, начинает развиваться смертельно опасная форма острой интоксикации организма.

афлатоксины

Медицина разделяет острое отравление на несколько видов:

  • Бронхолегочный афлатоксикоз.поражение кожи
  • Септический вид болезни.
  • Костный вид.
  • Поражения кожи.
  • Глазной вид заболевания.

Самый частый вид заболевания – бронхолегочный афлатоксикоз. Еще выделяют этот вид у людей, больных ВИЧ.

Болезнь проходит с характерными чертами:

  • Более быстрое развитие болезни. Из-за иммунодефицита, болезнь развивается в течение нескольких часов;
  • Происходит септическое заражение крови грибками «Аспергил»;
  • В дальнейшем возникают осложнения в легких и иных органах.

https://www.youtube.com/watch?v=EaSU_XeYCdU

Развитие всех этих осложнений, приводят, как правило, к летальному исходу больного. При периодическом употреблении зараженных продуктов питания, у человека начинают проявляться осложнения с костями и суставами. В некоторых случаях, это приводит к заболеванию – цирроз печени. Также, известны случаи, перелома костей. Это происходит из-за того, что развивается остеопороз.

При грудном вскармливании, с молоком матери, афлатоксин передается от матери ребенку. Велика вероятность того, что за 2 -3 недели у ребенка может развиться цирроз печени.

У людей с заболеванием гепатит B или C, высокая вероятность развития рака. Возможность его образования увеличивается в несколько раз. Так как, организм поражен действием яда, выработка необходимых иммунных тел резко снижается.

Острый афлатоксикоз

Самый опасный афлатоксикоз. Летальный исход может произойти по прошествии двух суток.Его симптомы:

  • Общие. Боль в мышцах сопровождается повышением температуры, потливостью, отечностью и слабостью.
  • Органы пищеварения. Проявляется болью в боку с правой стороны или болью в желудочно-кишечном тракте, приступы тошноты, рвоты и диареи.
  • Расстройство нервной системы. Проявление головокружения или сильной головной боли. Нарушение координации движений. Появляется судорожный синдром и паралич.

Если острый афлатоксикоз возник у детей, прогнозы не утешительные. Болезнь развивается стремительно: рвота, судороги и кома. Страшно, но факт: у 80% детей заболевших острым афлатоксикозом – наступает смерть. Пораженная печень и нервная система способствуют мгновенному развитию болезни. При легком или среднем отравлении она протекает около двух недель. В разы быстрее при остром отравлении. Афлатоксикоз – болезнь, в которой требуется срочное профессиональное медицинское вмешательство.

Первая помощь

До приезда врачей больному нужно оказать первую помощь. Необходимо промыть желудок и дать пациенту энтеросорбент. Этот поможет частично удалить яд из организма. Для очищения кишечника нужно поставить клизму с солевым раствором.

Если у пациента наблюдается сильная диарея и рвота, то существует опасность развития обезвоживания. Поэтому больному нужно давать пить небольшое количество жидкости.

Дальнейшее лечение проводится в условиях стационара.

В первую очередь не поддаваться панике и сохранять спокойствие. Действовать решительно и быстро.

  • Вызвать неотложную скорую помощь;
  • Постараться промыть желудок: вызвать рвоту, выпить 2-3 стакана воды с добавлением 2 чайных ложек соли на один стакан. Процедуру повторить 3-4 раза.
  • Дать выпить активированный черный уголь.
  • Обеспечить пострадавшему состояние покоя.

Дальнейшим лечением займутся медицинские работники.

Как определить наличие ядов

Как уже упоминалось, обнаружить этот яд в продуктах невооруженным глазом невозможно. Для выявления заражения пищи необходимо провести специальный анализ на афлатоксин. Такое возможно только в лабораторных условиях.

Определение афлатоксина В1 проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Перед анализом пробу очищают от пигментов и жиров. Количество токсина в продукте измеряют с помощью флуоресцентного или диодно-матричного детектора. В настоящее время это наиболее точный метод определения афлатоксина. Таким способом можно узнать количество ядовитых примесей в орехах, чае, кофе, зерне и других сухих продуктах.

Определение афлатоксина М1 в молоке и продуктах его переработки методом ВЭЖХ довольно трудоемко и занимает много времени. Поэтому в таких случаях используют специальные скрининговые тест-системы: “Ridascreen Fast Aflatoxin M1” и “Ridascreen Aflatoxin M1”. Они обладают высокой чувствительностью и позволяют определить яды в течение 30 – 120 минут (в зависимости от вида продукта).

Диагностика

Врач выявляет острый афлатоксикоз по клинической картине заболевания. Также важно установить: какие продукты употреблял больной незадолго до отравления.

В некоторых случаях требуется проведение лабораторных методов исследования. Назначают серологические и биохимические исследования крови.

Вся диагностика отравления афлатоксинами проводится только в лабораторных условиях. А это:

  • Микологический анализ мокроты и мазок слизистой оболочки. Минус этого метода – длительное исследование анализа;
  • Рентгенография. Дает возможность обнаружить наличие инфильтратов характерной формы;
  • Компьютерная томография легких. Этот способ позволяет определить и такие болезни, как туберкулез или рак легких;
  • Серологический лабораторный анализ крови;
  • Общий анализ мочи и крови, анализ крови на биохимию.

Важно, рассказать лечащему персоналу, источник предполагаемого отравления.

Симптомы отравления

Если в организм человека постоянно попадает небольшое количество яда, то возникает хронический афлатоксикоз. Постепенно происходит жировая дегенерация клеток печени. Патология характеризуется медленным течением и без лечения приводит к циррозу.

При попадании в организм большого количества яда развивается острый афлатоксикоз. Первые признаки ухудшения самочувствия появляются уже через 30 минут после употребления зараженной еды. При отравлении афлатоксинами характерны следующие симптомы:

  • головная боль;
  • ощущение усталости, апатия;
  • ухудшение координации движений;
  • нарушения походки;
  • боли в печени;
  • диспепсические явления (тошнота, рвота, диарея);
  • судороги;
  • параличи;
  • отеки;
  • повышение температуры тела.

Острое отравление афлатоксинами представляет собой крайне опасное состояние. Без лечения человек умирает в течение 48 часов от печеночной недостаточности. Поэтому в таких случаях необходимо немедленно вызывать скорую помощь. Особенно опасно такое отравление для ребенка. Острый афлатоксикоз в детском возрасте приводит к летальному исходу в 80% случаев.

При острой форме афлатоксикоза пациента экстренно госпитализируют в стационар. Терапию отравления начинают с промывания желудка при помощи зонда. Это предотвращает всасывание ядов.

Одновременно назначают курс энтеросорбентов: “Смекты”, “Энтеросгеля”, “Лактофильтрума”. Эти лекарства способствуют связыванию токсина и выведению яда из организма через кишечник. Принимать энтеросорбенты необходимо не менее 5 дней.

Больным ставят капельницы с дезинтоксикационными растворами. Вместе с этим назначают мочегонные препараты. Такая терапия облегчает выведение афлатоксинов через почки.

Показано назначение противогрибковых лекарств. Эти медикаменты являются антидотами к афлатоксинам и воздействуют на этиологию заболевания. Применяют следующие препараты:

  • “Итраконазол” (“Ирунин”).
  • “Кансидас”.
  • “Амфотерицин”.
  • “Вифенд”.

Афлатоксины в пищевых продуктах

Назначают иммуностимуляторы: “Тималин”, “Цитовир”. В период выздоровления показана витаминотерапия. Особенно полезно употребление витаминов группы В и аскорбиновой кислоты.

Острый афлатоксикоз

Симптомы отравления

Острый афлатоксикоз

Если медицинским персоналом установлен диагноз: «Острый афлатоксикоз», то необходима срочная госпитализация и лечение под пристальным наблюдением медиков.

Основные методы лечения:

  • Ликвидация источников токсичных веществ. Делается промывание желудка с использованием зонда. Если человек находится в сознательном состоянии, можно обойтись простым способом (выпить большой объем воды и спровоцировать рвоту). Также необходимо делать очищающие клизмы. Это остановить всасывание токсичных веществ в кровеносную систему.
  • Назначение медицинских лекарственных средств, которые обладают свойством выведения токсинов и очищение организма (Уголь активированный, Фильтрум сти, Полифепан, Лактофильтрум, Смекта, Энтеросгель). Курс лечения – минимум пять дней.
  • Шлаковыводящая терапия. Внутривенное капельное введение разных очищающих растворов и назначение диуретиков (мочегонные средства, способствующие торможению реабсорбации воды и солей в канальцах почек, а также увеличивающее их выведение из организма с мочой). Таким образом, уменьшается количество жидкости в тканях и серозных полостях. Требуется для того, чтобы ускорить процесс очищения от токсичных веществ через почки. Важно следить, чтобы выводимая жидкость, совпадала с вводимыми растворами. Так можно определить работоспособность почек.
  • Применение в лечении противогрибковых препаратов, в данной ситуации, непосредственно для борьбы с грибком «Аспергил». Это такие лекарства, как Итраконазол, Амфотерицин В, Каспофунгин, Вориконазол.  Противогрибковая терапия – главная составляющая в процессе лечения афлатоксикоза, так как оказывает непосредственное устранение источника заболевания. Во избежание образования устойчивых форм, необходимо проводить полный курс лечения.
  • Принятие лекарственных средств, способствующих стимуляции иммунного процесса: Цитовир, Тималин. Чем выше иммунитет больного, тем продуктивней лечение.
  • Назначение принятия витаминных комплексов. Укрепляет организм, помогает быстрому выздоровлению и предотвращает появление осложнений.

Лечение проводится под контролем медицинских работников, чтобы в случае осложнения, вовремя назначить дополнительное лечение.

_________________

* Наименование раздела 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. – Примечание изготовителя базы данных.Анализируемый образец экстрагируют смесью метанола и воды. Экстракт образца фильтруют, разбавляют водой и вводят в колонку для аффинной хроматографии, содержащую антитела, специфичные для афлатоксинов , , и .

боль в животе

_________________

* Наименование раздела 6 в бумажном оригинале выделено курсивом. – Примечание изготовителя базы данных.

6.1 Общие замечанияРастворы проб и стандартные растворы для определения с помощью ВЭЖХ должны содержать одинаковый растворитель или смесь растворителей.

6.2 ЭкстракцияВзвешивают 25 г гомогенизированной пробы, с точностью 0,1 г в сосуде блендера (см. 5.2). Добавляют 5 г хлорида натрия (см. 4.2) и 125 см растворителя для экстракции (см. 4.10) и гомогенизируют с помощью перемешивающего устройства в течение 2 мин при высокой скорости. Контролируют, чтобы время и скорость перемешивания не оказывали негативного влияния на эффективность экстракции.

Смесь фильтруют через рифленую фильтровальную бумагу (см. 5.3) ().Отбирают пипеткой 15 см () фильтрата в коническую колбу подходящего размера со стеклянной пробкой. Добавляют 30 см воды, закрывают колбу пробкой и перемешивают. Перед проведением аффинной колоночной хроматографии разбавленный экстракт фильтруют через фильтровальную бумагу из стеклянного микроволокна (5.4).

6.3 ОчисткаГотовят IA колонку (см. 5.1) и осуществляют процедуру очистки в соответствии с инструкциями производителя. Отбирают пипеткой 15 см () второго фильтрата () в емкость для растворителя IA колонки. Пропускают его через разделяющую колонку, затем промывают колонку, как это описано в инструкциях производителя и удаляют элюаты.

Начинают проводить элюирование афлатоксинов. Собирают этанольный или ацетонитрильный элюат (в зависимости от продукта или инструкций производителя) в мерной колбе вместимостью 2 см (см. 5.5) (или другого объема, установленного производителем). Разбавляют до метки водой (). Перемешивают и действуют в соответствии с 6.4.

Методы ввода в IA колонки, промывания и элюирования немного отличаются в зависимости от производителя колонки, и необходимо четко следовать конкретным инструкциям, прилагаемым к колонкам.Примечание – В целом, процедуры включают экстракцию образца смесью метанола и воды, фильтрацию или центрифугирование, возможное разбавление образца раствором фосфатного буфера или водой, загрузку под давлением в предварительно промытую колонку, промывку колонки дистиллированной водой и элюирование афлатоксинов метанолом или ацетонитрилом (в зависимости от продукта и инструкций производителя).

Допускается использовать традиционные колонки с силикагелем или колонки твердофазной экстракции. В этих случаях также необходимо четко следовать инструкциям производителя. Если растворитель, применяемый для элюирования афлатоксинов, не совместим с подвижной фазой, то элюат необходимо выпарить до сухого остатка в токе азота при температуре ниже 40 °С.

медработники

6.4 Условия работы при выполнении ВЭЖХВыход разделительной колонки подсоединяют к одному ответвлению тройника системы послеколоночной дериватизации (5.9.4) с помощью короткого фрагмента системы труб с внутренним диаметром, например, 0,25 мм. Ко второму ответвлению тройника подсоединяют выход насоса, который поставляет реагент для послеколоночной дериватизации.

Один конец витка труб из политетрафторэтилена или нержавеющей стали (см. 5.9.4) присоединяют к третьему ответвлению тройника и другой конец присоединяют к детектору (см. 5.10). Используя термостат или водяную баню, поддерживают температуру реакционного змеевика на уровне 70 °С.В случае использования колонки, указанной в 5.9.

6.5 ИдентификацияПроводят идентификацию каждого пика афлатоксина на хроматограмме образца путем сравнения значений времени удерживания со значениями соответствующих стандартов.Афлатоксины можно идентифицировать одновременным вводом раствора испытуемой пробы и градуировочных растворов. Кроме того, при идентификации помогает исчезновение пиков афлатоксинов и в случае, когда не проводится добавка реагента для дериватизации.

6.6Построение градуировочной зависимостиДля каждого афлатоксина строят градуировочную зависимость путем ввода 50 мкл стандартных растворов 1, 2, 3 и 4 (см. таблицу 2). Проверяют линейность зависимости [4].

6.7 ОпределениеКоличественное определение проводится методом внешнего стандарта с интегрированием площади пика или измерением высоты пика, которые далее соотносятся с соответствующими значениями для стандарта.В петлю инжектора вводят 50 мкл стандартного раствора в соответствии с инструкциями производителя инжектора.

Афлатоксины элюируют в порядке , , и с временем удерживания приблизительно 6, 8, 9 и 11 мин соответственно. Пики должны быть разделены до базовой линии. При необходимости регулируют значения времени удерживания путем изменения концентрации метанола подвижной фазы (4.11).Вводят 50 мкл () очищенного экстракта образца (см. 6.3) в инжекторную петлю.

Последствия для организма

Попадание в организм бактерий афлатоксина приводит к тяжелым последствиям. Как уже было написано, влечет повреждение многих органов. Отравление большим количеством афлатоксина, и после лечения, может привести к циррозу печени или раку. Поэтому у людей перенесших данный вид отравления, наблюдается целый ряд нарушений в работе организма:

  • Плохая усвояемость витамина D;
  • Потеря веса;
  • У детей и подростков возникают проблемы в развитии роста;
  • Расстройства в защитной работе иммунитета;
  • Различные заболевания почек;
  • Перебои в работе сердечно-сосудистой системе.

Конечно, совсем не обязательно, что данные проблемы возникнут у каждого, кто перенес отравление афлатоксинами. Но вероятность этого весьма велика. И в данной ситуации высказывание «Здоровая пища – залог здоровья», не является пустым. Если посмотреть на пример афлатоксина – можно понять, что речь идет о правильной или неправильной еде.

Как уже убедились, очагом опасности могут быть самые безобидные и простые продукты, при недобросовестном обращении и хранении их.

Профилактика

  • Выявление явных признаков присутствия грибка на стадии покупки товара.
  • Не употреблять просроченные продукты питания.
  • Соки, чай, молочную и мясную продукцию покупайте у проверенных производителей.
  • «Заострить» свое внимание на запахе и внешнем виде товара.

Для профилактики данного типа отравлений можно включить в рацион морковь, петрушку и сельдерей – они способствуют снижению уровня токсичных веществ в организме.

Чтобы предотвратить тяжелое отравление афлатоксинами, необходимо соблюдать следующие правила:

  1. При приобретении продуктов питания нужно обращать внимание на их срок годности. Очень часто повышенное количество афлатоксинов содержится в просроченной еде.
  2. Нельзя употреблять пищу даже с небольшими признаками плесени.
  3. Нужно избегать приобретения продуктов, которые хранились в условиях высокой влажности, например, на открытых рынках.
  4. Не следует создавать большие запасы круп, чая и кофе. В домашних условиях не всегда есть возможность соблюсти все необходимые правила хранения.
  5. Нужно почаще включать в рацион сельдерей, петрушку и морковь. Эти продукты снижают вред от попадания в организм афлатоксинов.

Особую осторожность нужно соблюдать при приобретении и использовании детского питания. Интоксикация афлатоксинами чрезвычайно опасна для ребенка. Упаковка с детским питанием должна быть чистой и сухой, смеси необходимо обнюхивать и пробовать на вкус перед тем, как дать их малышу. Открытые баночки допускается хранить только в холодильнике и использовать их как можно скорее. Это поможет избежать тяжелой и опасной интоксикации.

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой, с очисткой на иммуноафинной колонке и послеколоночной дериватизацией, для определения афлатоксинов в зерновых культурах, орехах и продуктах их переработки.Предел количественного определения афлатоксинаи суммы афлатоксинов,,и- 8 мкг/кг.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:ГОСТ ISO 5725-1-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения_______________* На территории РФ действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения.

ГОСТ 4159-79 Реактивы. Йод. Технические условияГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условияГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условияГОСТ 5789-78 Реактивы. Толуол. Технические условияГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условияГОСТ 22524-77 Пикнометры стеклянные.

Технические условияПримечание – При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю “Национальные стандарты”, который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя “Национальные стандарты” за текущий год.

Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.(Поправка. ИУС N 2-2015)

4 Реактивы

При отсутствии специальных указаний используют реактивы только признанных аналитических марок квалификации х.ч. или ч.д.а.

Плесневой грибок Аспергилла

4.1 Вода, не ниже 1-й степени, по [1].Вода не должна содержать органические примеси.

4.2 Хлорид натрия по ГОСТ 4233.

4.3 Йод кристаллический по ГОСТ 4159.

4.4 Афлатоксин, кристаллический или в виде пленочной ампулы.ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Афлатоксины канцерогенны для человека. Следует принимать во внимание заявление, сделанное Международным агентствами по исследованиям в области рака (ВОЗ) (см. [2], [3]).Необходимо надлежащим образом предохранять лабораторию, в которой проводятся анализы, от дневного света.

4.5 Ацетонитрил, степень чистоты для ВЭЖХ.

4.6 Метанол по ГОСТ 6995, степень чистоты ВЭЖХ.

А.7 Толуол по ГОСТ 5789.ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Толуол огнеопасен и токсичен. Приготовление стандартов с использованием данного растворителя следует проводить в вытяжном шкафу. Операции за пределами вытяжного шкафа, такие как измерение эталонов методом УФ спектрометрии, следует проводить с использованием эталонов в закрытых контейнерах.

4.8 Смесь толуол/ацетонитрилСмешивают 98 объемных частей толуола (4.7) с двумя объемными частями ацетонитрила (4.5) (см. предупреждение в 4.7).

4.9 Растворитель для экстракцииСмешивают семь объемных частей метанола (4.6) с тремя объемными частями воды (4.1).Другие смеси – растворители для экстракции, которые совместимы с подвижной фазой, могут также использоваться, если покажут себя более эффективными или будут рекомендованы производителем иммуноаффинной колонки.

4.10 Подвижная фазаСмешивают три объемные части воды (4.1) с одной объемной частью ацетонитрила (4.5) и одной объемной частью метанола (4.6). Перед использованием проводят дегазацию раствора.

4.11 Реагент для послеколоночной дериватизацииРастворяют 100 мг йода (4.3) в 2 см метанола (4.6). Добавляют 200 см воды (4.1), перемешивают в течение 1 ч, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (5.8). Раствор готовят на неделю использования и хранят в темноте или в склянке из коричневого стекла. Перед использованием раствор встряхивают в течение 10 мин.

где – оптическая плотность, определяемая в максимуме спектра поглощения; – молекулярная масса каждого афлатоксина, г/моль; – коэффициент молярного поглощения каждого афлатоксина в смеси толуол/ацетонитрил.Примечание – Это значение определено для раствора, который содержит 1 моль/дм афлатоксина и находится в кюветах с длиной оптического пути 1 см.

Коэффициент молярного поглощения () применяют без единиц измерения, допускается применять уравнение , ему соответствует единица измерений: дм·моль·см; – длина оптического пути кюветы, см. и приведены в таблице 1.Таблица 1 – Молекулярные массы и коэффициенты молярного поглощения афлатоксинов , , и

Афлатоксин

, г/моль

312

19300

314

20400

328

16600

330

17900

Примечание – В качестве растворителя используется смесь толуола и ацетонитрила (4.8)

4.13 Основной стандартный раствор смеси афлатоксиновГотовят исходный раствор, содержащий 500 нг/см афлатоксина , 125 нг/см афлатоксина , 250 нг/см афлатоксина и 125 нг/см афлатоксина в смеси толуол/ацетонитрил (4.8). При необходимости хранения раствора взвешивают колбу. Колбу плотно оборачивают алюминиевой фольгой и хранят при температуре около 4 °С.

4.14 Градуировочный раствор смеси афлатоксиновКаждую порцию основного стандартного раствора смеси афлатоксинов (4.13), как это указано в таблице 2, переносят в четыре мерные колбы вместимостью 2 см (5.5). Растворы выпаривают до сухого остатка в токе азота при комнатной температуре. В каждую колбу добавляют 1 см метанола (4.6).

Стандартный раствор

Объем, отобранный из исходного раствора, мкл

Концентрация афлатоксина, нг/см

1

60

15,0

3,75

7,50

3,75

2

40

10,0

2,50

5,00

2,50

3

20

5,00

1,25

2,50

1,25

4

10

2,50

0,625

1,25

0,625

Примечание – Указанные значения приведены в качестве ориентиров. Точные значения массовой концентрации растворов вычисляют исходя из значений, рассчитанных по формуле (1) – см. 4.12

4.15 Серная кислота, по ГОСТ 4204, раствор ()=2 моль/дм.

5 Оборудование

Лабораторную стеклянную посуду, которая контактирует с водными растворами афлатоксинов в серной кислоте (4.15), погружают в воду на несколько часов, затем тщательно промывают (например, три раза) водой, чтобы удалить все следы кислоты. Отсутствие кислоты проверяют с помощью индикаторной бумаги.Примечание – Данная обработка является необходимой, так как использование стеклянной посуды, промытой не кислотой, может привести к потере афлатоксинов.

На практике данная обработка необходима для круглодонных колб, мерных колб, мерных цилиндров, склянок или пробирок, используемых для градуировочных растворов и конечных экстрактов (особенно автоматических пипеток), а также пастеровских пипеток, если они используются для переноса градуировочных растворов или экстрактов.Обычное лабораторное оборудование и, в частности, то, которое приводится ниже.

5.1 Иммуноаффинная (IA) колонка

IA колонка содержит антитела, предназначенные для афлатоксинов , , и . Колонка должна иметь минимальную емкость не менее 100 нг афлатоксина и должна давать выход не менее 80% для афлатоксинов , и и не менее 60% для афлатоксина при внесении в колонку 15 см градуировочного раствора, содержащего 5 нг каждого афлатоксина в смеси метанол/вода [одна часть метанола (4.

5.2 Блендер, с баком смесителя на 500 см и крышкой.Рекомендуется использование высокоскоростного блендера.

5.3 Рифленая фильтровальная бумага, например, диаметром 24 см.

5.4 Фильтровальная бумага из стеклянного микроволокна, например, диаметром 11 см.

Кукуруза, пораженная грибком

5.5 Мерные колбы по ГОСТ 1770, вместимостью 2 смили пикнометрыпо ГОСТ 22524Примечание – При использовании пикнометров рекомендуется измерять фактическое значение вместимости и использовать его при обработке результатов измерений в качестве величины [см. формулу (3)]

5.6 Спектрофотометр, предназначенный для измерения оптической плотности в диапазоне длин волн от 200 до 400 нм.

5.7 Кюветы из кварцевого стекла толщиной 1 см, не имеющие существенного поглощения в диапазоне длин волн от 300 до 370 нм.

5.8 Мембранный фильтр для водных растворов, изготовленный из политетрафторэтилена, диаметром 4 мм и размером пор 0,45 мкм.

5.9 Оборудование для ВЭЖХ

5.9.1 Насос ВЭЖХ, способный производить скорость потока 1 см/мин.

5.9.2 Система ввода (инжектор), со шприцевой загрузкой и петлей 50 мкл или эквивалентным.

5.9.3 Аналитическая разделяющая колонка с обращенной фазой, например , которая обеспечивает разрешение пиков афлатоксинов , , и до базовой линии от всех остальных пиков и которая имеет следующие характеристики:- длина: 250 мм;- внутренний диаметр: 4,6 мм;- размер сферических частиц: 5 мкм.Допускается использование колонки меньшей длины.

5.9.4 Система послеколоночной дериватизации, состоящая из безпульсационного насоса и тройника, имеющего очень малый мертвый объем, системы труб из политетрафторэтилена или нержавеющей стали длиной от 3000 до 5000 мм и внутренним диаметром 0,5 мм, а также водяной бани или послеколоночного реактора для реакции с участием йода.

5.10 Флуоресцентный детектор, пригодный для работы при длине волны возбуждения 365 нм и излучении при длине волны эмиссии 435 нм (для фильтровых приборов длина волны регистрации излучения {amp}gt;400 нм), с пределом детектирования не более 0,05 нг афлатоксина в объеме ввода (в данном случае он равен 50 мкл).

Приложение А (справочное). Результаты межлабораторного сравнительного испытания

_______________

* Слово “Обработка” в наименовании раздела 7 в бумажном оригинале выделено курсивом. – Примечание изготовителя базы данных.Рассчитывают массу *, г, анализируемой пробы, присутствующей во фракции второго фильтрата, взятого для IA колонки (), по формуле

, (2)*

_________________* Обозначение и формула соответствуют оригиналу. – Примечание изготовителя базы данных.где – масса пробы образца (см. 6.2), г (25 г); – общий объем первого фильтрата (см. 6.2), см (125 см);_______________ Принимая во внимание данные по точности метода, может рассматриваться как эквивалент объема растворителя экстракции.

– объем фракции первого фильтрата (см. 6.2), взятый для разбавления, см (15 см); – общий объем второго фильтрата (см. 6.2), см (45 см); – объем фракции второго фильтрата (см. 6.3), см (15 см).Рассчитывают массовую долю каждого афлатоксина, , в микрограммах на килограмм пробы, вычисляют по формуле 3 (метод внешнего стандарта)

где – объем элюата (6.3), мкл (2000 мкл); – объем очищенного и введенного экстракта образца (6.7), мкл (50 мкл); – масса данного афлатоксина, присутствующего в введенном объеме, соответствующая измеренной площади пика или высоте пика, определяемая по градуировочной характеристике, в нанограммах; – масса анализируемой пробы, г, соответствующей фракции второго фильтрата, взятого для IA колонки () (см. формулу (2)).Для получения массовой доли суммы афлатоксинов суммируют массовые доли четырех афлатоксинов.

Приложение А(справочное)

1 соответственно.В исследовании участвовало десять лабораторий, имелся один экземпляр каждого образца. Во время проведения данного межлабораторного сравнительного испытания в качестве реагента послеколоночной дериватизации использовался йод.Таблица А.1 – Данные по прецизионности и открываемости афлатоксина для кукурузы

Параметр

Афлатоксин

Сумма

Число лабораторий, оставшихся после исключения лабораторий с резко отличающимися результатами

9

9

9

10

9

Число принятых результатов

8*

18

18

20

18

Среднее значение , мкг/кг

14,88

1,38

7,18

1,05

24,49

Стандартное отклонение сходимости , мкг/кг

0,68

0,35

0,68

0,20

1,79

Коэффициент вариации сходимости, %

5,8

25

9,5

19

7,3

Предел сходимости (), мкг/кг

2,4

0,98

1,90

0,56

5,0

Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг

1,50

0,41

0,68

0,53

2,86

Коэффициент вариации воспроизводимости, %

10

30

9,5

51

11,7

Предел воспроизводимости (), мкг/кг

4,20

1,15

1,90

1,48

8,01

Выход, %

85

55

96

42

81

_________________* Текст документа соответствует оригиналу. – Примечание изготовителя базы данных.Таблица А.2 – Данные по прецизионности и открываемости афлатоксина для арахисового масла

Параметр

Афлатоксин

Сумма

Число лабораторий, оставшихся после исключения лабораторий с резко отличающимися результатами

10

9

10

10

10

Число принятых результатов

20

18

20

20

20

Среднее значение , мкг/кг

5,26

0,58

2,34

0,24

8,42

Стандартное отклонение сходимости , мкг/кг

0,78

0,12

0,55

0,19

1,45

Коэффициент вариации сходимости, %

14,9

21

24

79

17

Предел сходимости (), мкг/кг

2,2

0,34

1,54

0,53

4,06

Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг

1,56

0,22

0,71

0,24

2,54

Коэффициент вариации воспроизводимости, %

30

38

31

101

30

Предел воспроизводимости (), мкг/кг

4,37

0,62

1,99

0,67

7,11

Выход, %

90

70

93

29

84

Таблица А.3 – Данные по прецизионности и открываемости афлатоксина для арахиса

Параметр

Афлатоксин

Сумма

Число лабораторий, оставшихся после исключения лабораторий с резко отличающимися результатами

9

10

10

10

9

Число принятых результатов

18

20

20

20

18

Среднее значение , мкг/кг

9,71

1,07

4,54

0,65

16

Стандартное отклонение сходимости , мкг/кг

0,53

0,25

0,28

0,27

0,83

Коэффициент вариации сходимости, %

5,5

23

6,2

42

5,2

Предел сходимости (), мкг/кг

1,48

0,70

0,78

0,76

2,3

Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг

1,62

0,41

0,66

0,50

2,58

Коэффициент вариации воспроизводимости, %

17

38

15

77

16

Предел воспроизводимости (), мкг/кг

4,54

1,15

1,85

1,4

7,22

Выход, %

83

64

91

39

80

8 Прецизионность

8.1 Межлабораторное сравнительное испытаниеДетали межлабораторного сравнительного испытания прецизионности данного метода приведены в приложении А. Значения, полученные в результате межлабораторного сравнительного испытания, могут быть неприменимы к диапазонам концентраций и матрицам, отличных от тех, которые приведены в приложении А.

8.2 ПовторяемостьАбсолютная разница между двумя независимыми отдельными результатами испытаний, полученными при использовании одного и того же метода, идентичных материалов для испытаний в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором с использованием того же оборудования в течение короткого интервала времени, будет превышать предел повторяемости , значения которого приведены ниже, не более чем в 5% случаев.

a) Значения для кукурузы:- афлатоксин : 14,9 мкг/кг, 2,4 мкг/кг,- афлатоксин : 1,4 мкг/кг, 1,0 мкг/кг,- афлатоксин : 7,2 мкг/кг, 1,9 мкг/кг,- афлатоксин : 1,0 мкг/кг, 0,6 мкг/кг,- общее содержание афлатоксинов: 24,5 мкг/кг.

b) Значения для арахисового масла:- афлатоксин : 5,3 мкг/кг, 2,2 мкг/кг,- афлатоксин : 0,6 мкг/кг, 0,3 мкг/кг,- афлатоксин : 2,3 мкг/кг, 1,5 мкг/кг,- афлатоксин : 0,2 мкг/кг, 0,5 мкг/кг,- общее содержание афлатоксинов: 8,4 мкг/кг.

c) Значения для арахиса:- афлатоксин : 9,7 мкг/кг, 1,5 мкг/кг,- афлатоксин : 1,1 мкг/кг, 0,7 мкг/кг,- афлатоксин : 4,5 мкг/кг, 0,8 мкг/кг,- афлатоксин : 0,6 мкг/кг, 0,8 мкг/кг,- общее содержание афлатоксинов: 16 мкг/кг.Основываясь на полученных результатах, содержание афлатоксинов в арахисовом масле можно только оценить.

8.3 ВоспроизводимостьАбсолютная разница между двумя отдельными результатами испытаний, полученными при использовании одинакового метода, идентичных материалов для испытаний в различных лабораториях различными операторами и с использованием различного оборудования, будет превышать предел воспроизводимости , значения которого приводятся ниже, не более чем в 5% случаев.

a) Значения для кукурузы:- афлатоксин : 14,9 мкг/кг, 4,2 мкг/кг,- афлатоксин : 1,4 мкг/кг, 1,2 мкг/кг,- афлатоксин : 7,2 мкг/кг, 1,9 мкг/кг,- афлатоксин : 1,0 мкг/кг, 1,5 мкг/кг,- общее содержание афлатоксинов: 24,5 мкг/кг.

b) Значения для арахисового масла:- афлатоксин : 5,3 мкг/кг, 4,4 мкг/кг,- афлатоксин : 0,6 мкг/кг, 0,6 мкг/кг,- афлатоксин : 2,3 мкг/кг, 2,0 мкг/кг,- афлатоксин : 0,2 мкг/кг, 0,7 мкг/кг,- общее содержание афлатоксинов: 8,4 мкг/кг.

c) Значения для арахиса:- афлатоксин : 9,7 мкг/кг, 4,5 мкг/кг,- афлатоксин : 1,1 мкг/кг, 1,2 мкг/кг,- афлатоксин : 4,5 мкг/кг, 1,8 мкг/кг,- афлатоксин : 0,6 мкг/кг, 1,4 мкг/кг,- общее содержание афлатоксинов: 16 мкг/кг.Основываясь на полученных результатах, содержание афлатоксинов в арахисовом масле можно только оценить качественно.

9 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать:- всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;- используемый метод отбора образцов, если он известен;- используемый метод испытаний, со ссылкой на настоящий стандарт;- детали проведения работ, не установленные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, а также все факторы, влияющие на результат(ы) испытаний;- полученные результат(ы) испытаний или, если была проведена проверка повторяемости, полученный окончательный результат.

Библиография

[1]

ISO 3696:1987 Water for analytical laboratory use. Specification and test methods (ИСО 3696:1987 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

[2]

Castegnaro М., Hunt D.C., Sansone Е.В., Schuller P.L., Siriwardana M.G., Telling G.M., van Egmond H.P. и Walker E.A. Лабораторная очистка и разрушение афлатоксинов , , и в лабораторных отходах. Научная публикация IARC N 37, Международное агентство по исследованиям в области рака (ВОЗ), Лион (Франция), 1980 г., стр.59

[3]

Castegnaro М., Barek J., Fremy J.M., Lafontaine M., Miraglia M., Sansone E.B. и Telling G.M. Лабораторная очистка и разрушение канцерогенов в лабораторных отходах: некоторые микотоксины. Публикация IARC N 113, Международное агентство по исследованиям в области рака (ВОЗ), Лион (Франция), 1991 г., стр.63

[4]

Van Trijp J.M.P. и Roos А.Н. Модель для расчета калибровочных кривых, доклад RIKILT, 91, 02, январь 1991 г.

________________________________________________________________________________________УДК 637.544:006.354 МКС 67.060 MOD67.080.10Ключевые слова: пищевые продукты, афлатоксины , , и зерновые культуры, арахис, арахисовое масло, кукуруза, высокоэффективная хроматография, иммуноафинная хроматография________________________________________________________________________________________

https://www.youtube.com/watch?v=Fql4hlMPb1o

Редакция документа с учетомизменений и дополнений подготовленаАО “Кодекс”

Поделиться:
Нет комментариев

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.

×
Рекомендуем посмотреть
Adblock detector